亚硝酸盐氮试剂测定主要通过分光光度法实现，核心是利用显色剂与水样中的亚硝酸盐氮发生重氮化-偶合反应，生成紫红色化合物后测吸光度。以下是具体使用步骤及注意事项，以N-(1-萘基)-乙二胺分光光度法为例：一、试剂准备与配制
显色剂溶液
磺胺溶液（10g/L）：称取1.0g对氨基苯磺酰胺，溶于50mL浓盐酸（ρ=1.18g/mL）中，加水稀释至100mL，避光保存（有效期1个月）。
标准溶液
储备液（100μg/mL）：称取0.7218g经105℃干燥2h的亚硝酸钠（NaNO₂），溶于水并定容至1000mL。
使用液（1.00μg/mL）：吸取10.00mL储备液，稀释至1000mL，现用现配。
二、操作步骤
1. 标准曲线绘制
步骤：
取6支比色管（50mL），分别加入0、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00mL标准使用液，加水至50mL。
向每管加入1.0mL磺胺溶液，混匀后静置3~5分钟（重氮化反应）。
加入1.0mL NEDA溶液，混匀后静置15分钟（偶合反应，生成紫红色染料）。
用分光光度计在540nm波长处测吸光度，以浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
关键点：
显色时间需严格控制在15分钟，温度保持20~25℃。
比色皿需用蒸馏水清洗后擦干，避免指纹或残留物影响结果。
2. 水样测定
步骤：
取50mL水样（若亚硝酸盐氮浓度过高，需预先稀释）于比色管中。
按标准曲线步骤加入1.0mL磺胺溶液和1.0mL NEDA溶液，显色后测吸光度。
三、注意事项
干扰物质处理
余氯干扰：若水样含余氯，需加氨基磺酸铵（1g/L）消除，每50mL水样加1滴，至余氯味消失。
金属离子干扰：高浓度铁、铜会显色，可加EDTA二钠（1g/L）掩蔽。
有机物干扰：若水样浑浊或有色，需用活性炭过滤或预蒸馏。
试剂保存
磺胺和NEDA溶液需避光保存，NEDA溶液冷藏后出现红色沉淀需重新配制。
标准溶液需定期标定，避免浓度变化。
显色条件控制
显色温度过高会导致颜色衰减，过低则反应不完全，建议使用恒温水浴。
显色时间不足或过长均会影响结果，需严格计时。
仪器校准
分光光度计需预热30分钟，波长调至540nm，比色皿匹配性需一致。
四、常见问题解决
吸光度不稳定
检查比色皿是否清洁，或重新配制显色剂。
确认显色时间是否一致，避免操作延迟。
标准曲线偏差大
检查标准溶液配制是否准确，或重新绘制曲线。
确认分光光度计波长是否准确，比色皿是否配对。
水样无显色
检查水样是否含亚硝酸盐氮，或是否被氧化为硝酸盐（需加还原剂）。
确认显色剂是否失效，需重新配制。
五、其他测定方法对比
方法原理优点缺点
分光光度法重氮化-偶合显色操作简单，成本低干扰物质需预处理
离子色谱法离子交换柱分离检测灵敏度高，可同时测多种离子设备昂贵，需专业人员操作
电极法亚硝酸盐选择性电极测电位实时监测，适合在线使用易受温度、pH影响
通过规范操作和严格质控，可确保亚硝酸盐氮测定的准确性。如需现场快速检测，可选择试纸法或便携式分光光度计；若需高精度分析，建议采用离子色谱法。
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